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时间:2020-10-30来源:未知作者:admin点击:
两条引物与靶序列的两条链反向互补引物结合位点可能只相隔数个或多达数千个核苷酸,这可按研究者的需要来定。DNA是从结合的引物3端起始。引物的延伸温度在55~70C,由热稳定DNA聚合

  两条引物与靶序列的两条链反向互补引物结合位点可能只相隔数个或多达数千个核苷酸,这可按研究者的需要来定。DNA是从结合的引物3’端起始。引物的延伸温度在55~70C,由热稳定DNA聚合酶催化。这个过程重复25~35次,通常在PCR仪上进行。PCR仪是可控制循环反应中每一步的时间和温度的可编程装置。

  第一轮循环产生两个子代DNA分子,作为下轮循环的模板。产物的长度即是两条引物结合模板位点的5端之间的距离。PCR反应持续25个以上循环,直至引物和dNTP的浓度下降到不足以支持循环的进行(Liu and Saint 2002a,b)。

  理论上,每次循环靶序列的拷贝数倍增,而实际上,每次循环靶序列的拷贝数增加的倍数都小于1。之所以与理论模型有出入,影响因素很多,如反应中存在抑制剂、热稳定聚合酶的性质、部分模板降解、部分引物在模板上错配等。

  PCR反应的必要成分下述成分是建立PCR反应所必需的。热稳定DNA聚合酶。催化模板依赖的DNA合成。目前有多种酶可供选择,这些酶在保真度、扩增效率及合成大片段DNA的能力方面有所不同。

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